生化需氧量（BOD）是衡量水体中有机污染物含量的重要指标，它反映了在一定条件下，微生物分解水中可生化降解有机物所消耗的溶解氧数量。稀释法是常用的BOD检测方法之一，但在实际操作过程中，需要注意一系列关键问题，以保障检测结果的准确性和可靠性。
水样采集与处理是检测的第一步，也是影响结果的关键环节。在采集水样时，应避免充氧采样，采样管应完全浸没于水中，使水样慢慢流入采样瓶内，不留空间，并用水封口。对于BOD值较低的水样，最好使用玻璃容器采样，以减少容器材质对检测结果的影响。如果水样中含有游离的酸和碱，应在中和后再进行稀释培养，以避免酸碱度对微生物活性的影响。
稀释比的选择至关重要。稀释比通常根据水样的化学需氧量（COD）值来确定。如果不了解水样性质，需要选择三个以上的稀释比，如COD/3、COD/4、COD/5，以保障水样中的有机物浓度在测量范围内。稀释时，应使用无油空气压缩机曝气，使溶解氧接近饱和，并加入适量的氯化钙、氯化铁溶液、硫酸镁溶液和磷酸盐缓冲液，以维持水样的适宜pH值和营养盐浓度。稀释水的温度应控制在20℃左右，这是保证微生物活性的关键温度。
接种液的使用也是影响检测结果的一个重要因素。对于微生物含量较少的工业废水或消毒处理过的水样，需要加入接种液以促进微生物活动。接种液一般来源于生活污水，经过24-36小时的驯化后，取上清液作为接种液。接种液的加入量应根据水样的具体情况进行调整，以保障微生物在培养过程中有足够的活性。在培养过程中，应严格控制培养箱的温度和时间。培养箱的温度应严格控制在（20±1）℃，培养时间一般为5天。同时，应避免光照对水样中藻类的影响，因为藻类在没有完全避光的情况下培养可能会产生气泡，从而影响溶解氧的测量结果。
综上所述，使用稀释法检测水中BOD时，需要注意水样采集与处理、稀释比的选择、接种液的使用以及培养过程的控制等多个环节。只有严格控制这些环节，才能保障检测结果的准确性和可靠性。
